串聯(lián)親和純化(TAP)-質譜鑒定

【技術簡介】

（1）技術原理

串聯(lián)親和純化（tandem affinity purification, TAP）技術基本原理包括：重組構建帶有兩種親和純化標簽的融合靶蛋白，然后轉染到宿主細胞或組織，帶標簽的靶蛋白表達并結合上相關蛋白質后，利用標簽與相應磁珠作用，兩步純化得到相關蛋白質。TAP技術聯(lián)合質譜對純化后的蛋白質進行分析，通過生物信息學獲得的蛋白相關性可信度高，為后續(xù)的驗證工作節(jié)省大量時間。

（2）技術應用

    TAP與質譜技術聯(lián)用已成為一種高效且實用的方法，在生物大分子相互作用領域中被廣泛應用。近些年，隨著TAP標簽的全面改進和質譜技術的不斷發(fā)展，TAP-MS的靈敏度與專一性得到很大提高，使得該技術得以在更多領域發(fā)揮重要作用，也使得我們對蛋白質復合體進行系統(tǒng)性研究成為可能。

【服務內容】

構建融合Flag-HA的誘餌蛋白真核表達載體或者慢病毒載體；載體瞬時轉染靶細胞或包裝慢病毒感染靶細胞；TAP純化互作蛋白；質譜鑒定互作蛋白。

【客戶須知及標本要求】

（1）客戶須明確檢測目的和具體要求，最好能提供1~2篇文獻或資料。

（2）SDS-PAGE條帶：考染，條帶清晰可見；蛋白質溶液：蛋白質總量>5μg/μl。

（3）蛋白洗脫液：定量并計算總蛋白量，真空干燥后，密封好管口，冰袋包裝寄送。

（4）蛋白質條帶（考染）：從凝膠上割取條帶時，避免污染，將條帶放入EP管內，密封好管口，冰袋包裝寄送。